「單車百萬行」周日（3月16日）早上7時舉行，賽道涵蓋青沙公路、南灣隧道、汀九橋及昂船洲大橋的行車線，警方預計當日會有4,000名車手參加。並於周日凌晨1時起，開始逐步封路，包括屯門公路往汀九橋支路、西九龍公路往青沙公路機場方向支路、青朗公路近大欖隧道出口等。
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新界南總區行動部署總理督察楊慧嫻表示，活動當日，主辦單位將安排接駁巴士，分別由葵芳港鐵站、荃灣西鐵站及青衣港鐵站接載參加者前往會場；參加者亦可自行乘搭公共交通工具前往會場。
當日亦設特別交通安排，近美景花園附近的青康路、青衣路及細山路一帶有交通管制措施，禁止所有未經許可車輛上落客，市民亦需跟從現場警務人員或工作人員指示，到附近適當位置停車後，步行前往會場。
由於賽道涵蓋青沙公路、南灣隧道、汀九橋及昂船洲大橋的行車線，活動當日，車輛不能駛往汀九橋。西九龍公路往青沙公路支路亦會封閉，駕駛者可使用三號幹線及長青隧道前往機場或青衣一帶。賽事進行期間，八號幹線青沙公路介乎昂船洲大橋至南灣隧道一帶的兩邊行車線封閉。警方根據比賽及清理賽道進度，分兩階段於上午約11時及下午約1時逐步解封道路。
今次活動封路範圍，還涉及3個屋苑，包括明翹匯、青富苑 及美景花園。主辦單位表示，已在活動前派發相關行車證件予受影響的屋苑住戶。持有相關行車證件的住戶，可以駕駛車輛進入封路範圍，主辦單位在活動當日，並不會提供任何泊車位。
警方呼籲，參加者乘坐主辦單位安排的接駁巴士，由港鐵葵芳站、荃灣西站及青衣站前往會場，並建議參加者入會場前預先準備登記證，縮減等候時間，作活動登記、安檢及領取單車。
